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新疆不同来源金黄壳囊孢的多样性

赵颖, 马荣, 尹永香, 张志东, 田呈明

生物多样性 2019, 27 (10): 1122-1131. DOI: 10.17520/biods.2019180

摘要（2670）

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为明确新疆不同寄主及地理来源的金黄壳囊孢(Cytospora chrysosperma)的多样性, 探讨种内亲缘关系和多样性差异。作者通过记录菌株在PDA培养基上的菌落颜色、形状、子实体形态等特征, 并应用Biolog-FF技术及ISSR分子标记技术, 比较了来自新疆5个地区5种寄主上的47株金黄壳囊孢的培养特征、生理生化特征及遗传多样性。结果表明47株金黄壳囊孢依据培养特征可划分为15种类型。不同类型菌株在碳源利用及代谢能力上存在差异, 各菌株对碳源的利用数量随着培养时间的增长逐渐增多。菌株882利用的碳源数量最多, 培养120 h可利用28种不同碳源, 碳源代谢能力中等; 菌株812-1利用的碳源数量最少, 培养120 h仅利用7种碳源, 代谢能力较低; 菌株1074-2、847、934、891-1、896、740具有单独利用碳源的能力。基于遗传相似性系数进行聚类分析, 结果显示遗传相似性系数为0.58时, 47个菌株被划分为两大类群, 其中第二类群菌株的培养特征为: 菌落白色、子实体较小且分布密集。供试金黄壳囊孢的多样性主要受自身遗传结构的影响, 不同寄主种类和地理来源对多样性的影响不显著。

编号 No.	引物 Primer	引物序列(5′-3′) Primer sequence (5′-3′)	退火温度 Annealing temp. (℃)
1	IJ-5	GAGAGAGAGAGAGAGATG	52
2	IL-7	ACAACACACACACACAC	52
3	IJ-7	GGGTGGGGTGGGGTG	52
4	IJ-9	AGATGTGTGTGTGTGTG	52
5	IJ-8	ATAAGAGAGAGAGAGAG	52
6	ID-8	GTGCGTGCGTGCGTGC	52
7	IL-3	CACGAGAGAGAGAGAGA	52
8	IQ-2	CCAAACCACCACCACCACCA	53
9	IJ-3	AGAGAGAGAGAGAGAGTC	53
10	IJ-4	GAGAGAGAGAGAGAGATC	53

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表2 本研究中ISSR引物序列

正文中引用本图/表的段落

以菌落颜色、形状、表面形态、有无子实体产生及子实体的分布,采用NTSYS Version 2.10软件对供试菌株进行模糊聚类(Rohlf, 1987; 杨华, 2008①(①杨华 (2008) 不结球白菜的收集、保存与遗传多样性分析. 硕士学位论文, 华中农业大学, 武汉))。

从普洛麦格生物技术有限公司购置了基因组提取试剂盒完成了菌株的基因组DNA提取。从28条ISSR引物中筛选出条带清晰、重复性好且多态性较丰富的10条引物(张俊娥等, 2017), 对金黄壳囊孢遗传多样性进行分析。引物由上海生工生物工程有限公司合成(表2)。

ISSR-PCR反应体系40 μL: 10 × Buffer 4 μL, dNTP 3.2 μL, 上游引物(Primer 1): 2 μL (10 μM), 下游引物(Primer 2): 2 μL (10 μM), DNA (50 ng/μL) 2 μL, Taq酶(5 U/mL) 0.2 μL, ddH₂O 26.6 μL。PCR扩增程序为: 94℃预变性5 min, 94℃变性30 s, 退火1 min, 72℃延伸2 min, 变性-退火-延伸循环35次;最后72℃延伸10 min。退火温度设定见表2。

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