Plant Diversity ›› 2001, Vol. 23 ›› Issue (02): 1-3.
• 研究论文 •
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测胰蛋白酶抑制剂的方法
桑玉英 胡金勇 曾英
- 中国科学院昆明植物研究所植物生物技术室
A Fast Method for the Detection of TrypsinInhibitors Using Polyacrylamide Gel Electrophoresis
SANG Yu-Ying HU Jin-Yong ZENG Ying
- Laboratory of Biotechnology, Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences
摘要： SDS-PAGE-明胶电泳是检测蛋白酶抑制剂的常用方法,基本原理为:聚丙烯酰胺凝胶中加入SDS和明胶,SDS使蛋白酶抑制剂发生可逆变性.电泳完毕,用Triton X-l00恢复凝胶板中蛋白酶抑制剂的活性,凝胶板置于蛋白酶溶液里保温,含蛋白酶抑制剂部位的明胶不被蛋白酶水解而呈现蛋白染色带.SDS-PAGE-明胶电泳检测蛋白酶抑制剂时,在同一块凝胶板上可同时检测酸性、碱性及中性的蛋白酶抑制剂,但电泳后处理(包括复性,酶解,漂洗和染色)时间长(约20h),而且对于同一样品中分子量相近的蛋白酶抑制剂用该方法得不到很好的分离和检测.因此,我们发展了常规PAGE-明胶电泳检测法.本方法不必复性,电泳后处理时间大为缩短(约3 h),在一定程度上也提高了检测灵敏度,尤其适于检测在SDS-PAGE-明胶电泳中得不到很好分离的蛋白酶抑制剂样品.云南省自然科学基金资助项目(199900077M)……