Plant Diversity ›› 1999, Vol. 21 ›› Issue (02): 1-3.
• 研究论文 •
天麻抗真菌蛋白GAFP-I的一级结构和 cDNA克隆
胡忠,黄清藻,刘小烛,杨俊波
- 中国科学院昆明植物研究所，昆明650204
Primary Structure and cDNA Cloning of the Antifungal Protein GAFP - I from Gastrodia elata
HU Zhong, HUANG Qing-Zao, LIU Xiao-Zhu, YANG Jun-Bo
- Kunmming Institute of Botany,Chinese Academy of Sinica,Kunming 650204
摘要： 天麻抗真菌蛋白 Gi-1是从天麻（Gastrodia elat Bl．）顶生球茎分离的 14kD蛋白，它能强烈抑制腐生真菌菌丝的生长，在天麻限制和防止密环菌(Armillaria mellea)侵染球茎的防卫机制中起重要作用。本文报告GAFP-I的一级结构和cDNA克隆的核苷酸序列。首先测得N-末端7个氨基酸序列为SDRLNSG-用以合成一个简并引物，由天麻营养球茎提取RNA，通过 3’-RACE技术扩增到一个600hp的cDNA片段，直接克隆到 pGE-T载体中测定核苷酸序列。根据cDNA核苷酸序列和用羧肽酶A测得GAFP-I的C-末端为-ASG，确认该cDNA含有429 hp编码区，它编码一条129个氨基酸的GAFP-I和14个氨基酸的C-末端扩展肽。同时，分离和纯化GAFP－I经过羟胺裂解和α-糜乳胰蛋白酶消化产生的肽段，经自动Ed－rnan降解程序测出它们的氨基酸序列。结果表明，由此测出的GAFP-I氨基酸序列和由cDNA核苷酸序列推导出的序列98.％一致。GAFP－I由 129个氨基酸组成，富含 Asn（19）、Gy（14），29和52位间有一对双硫键，计算分子量为13958 Da。GAFP－I与雪花莲（Galanthus nivalis L．）凝集素 LECGNA 2的氨基酸序列有很高的相似性，该凝集素 105个氨基酸全序列与GM－I相应序列之间相同和相匹配氨基酸达65％，包括一对定位相同的双硫键。编码GAFP－I的cDNA核苷酸序列已发GenBank数据库：accession number AF123309。