Plant Diversity ›› 2004, Vol. 26 ›› Issue (04): 1-3.
• 研究论文 •
非洲菊基因组DNA提取及ISSRPCR扩增模板浓度优化
李宗菊，熊丽，桂敏，李金泽，刘小莉，刘飞虎
- 云南大学生物技术系，云南 昆明650091；云南省农业科学院园艺研究所，云南 昆明650205
摘要： 以改良的CTAB法为基础，对非洲菊基因组DNA提取进行了下述优化：在第二次用氯仿/异戊醇抽提时，加入“PCN”溶液(00675?g PVP，45?μl 10% CTAB+4% NaCl)，可明显去除多糖；在材料研磨时加入化学物质M(01000?g Na2SO3，00500?g VC)及N(00200?g VE，01000?g Na2B4O7，00200?g PVP，200?μl β-巯基乙醇)，都可去除酚类物质，明显提高DNA及ISSRPCR扩增的质量，但N的效果稍优于M；同时加入M、N及“PCN”，具有明显的优化效果，所提5个样品DNA，平均A260/A280、A260/A230分别为181、202，浓度为0649?μg/μl，片段大小约为49?kb，ISSR扩增带多且清晰、明亮、稳定性及多态性高，表明DNA纯度很高。对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明，所提DNA模板必须稀释30倍(浓度为15～30?ng/μl时)，才能扩增出清晰的谱带。